產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 產(chǎn)品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
產(chǎn)品名稱 | 鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Mycobacterium avium subspecies paratuberculosisPCR |
分類 | PCR檢測(cè)試劑盒 |
運(yùn)輸及保存:
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測(cè)試劑盒低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,產(chǎn)品僅用于科研只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加):
乙酸鉀/醋酸鉀/Potassium acetateAR,92%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,127-08-2RT
草酸氫鉀/乙二酸氫鉀/重草酸鉀/酸性草酸鉀/乙二酸單鉀鹽/Potassium hydrogen oxalateCP,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,127-95-7RT
酒石酸氫鉀/重酒石酸鉀/酸性酒石酸鉀/酒石酸鉀/2,3-二羥基-(R-(R*,R*))-丁二酸單鉀鹽/L(+)-酒石酸氫鉀/L-酒石酸鹽氫鉀/L-酒石酸氫鉀/Potassium hydrogen tartrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,868-14-4RT
檸檬酸鉀/枸櫞酸鉀/檸檬酸三鉀/2-羥基-1,2,3-丙三羧酸三鉀鹽/Potassium citrate monohydrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:6100-05-6RT
甲酸鉀/蟻酸鉀/Potassium formateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,590-29-4RT
油酸鉀/十八碳烯酸鉀/(Z)-9-十八烯酸鉀鹽/十八烯酸鉀/Potassium oleateCP250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,143-18-0RT
草酸鉀/乙二酸鉀/草酸二鉀一水合物/Potassium oxalate monohydrateAR,99.8%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6487-48-5RT
硬脂酸鉀/十八酸鉀/Potassium stearateCP,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,593-29-3RT
四草酸鉀/四乙二酸鉀/草酸三氫鉀/二草酸三氫鉀/三氫二草酸鉀二水合物/Potassium tetraoxalate dihydrateCP,99.5%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6100-20-5RT
草酸鈦鉀/乙二酸鈦鉀/雙草酸氧化鈦(IV)酸鉀二水合物/Potassium titanyl oxalate dihydrateAR,98.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,14402-67-6RT
四苯硼鉀/四苯硼化鉀/四苯基硼酸鉀/Potassium tetraphenylborateCP,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3244-41-5RT
亞碲酸鉀/碲(IV)酸鉀/亞蒂酸鉀/Potassium telluriteCP,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7790-58-1RT
丁二酮肟/二甲基乙酰肟/丁二酮二肟/二乙二肟/丁二肟/雙乙酮肟/鎳試劑/二乙酰二肟/二甲基乙二醛肟/二甲基乙二肟/2,3-丁二酮二肟/DimethylglyoximeAR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,95-45-4RT
二乙酰一肟/2,3-丁二酮一肟/聯(lián)乙酰一肟/雙乙酰一肟/甲基肟乙基甲酮/丁二酮單肟/2,3-丁二酮肟/2,3-丁烷二酮一肟/肟乙基甲酮/丁二酮一肟/二甲基乙二酰一肟/Diacetyl monoximeAR10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,57-71-6RT
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測(cè)試劑盒2-Chloro-6-fluorobenzyl chloride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Helicid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
1-(5-Bromo-2-methoxy-phenyl)adamantane 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
POLYETHYLENE GLYCOL MONOOLEYL ETHER 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3-Bromo-2-chlorothiophene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
BASF PALAMOLL 646 質(zhì)量規(guī)格:色價(jià)E(1%)=150;紅花黃色素含量>95%
Chondroitin sulfate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Methyl 2-(methylamino)benzoate 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR
技術(shù)特點(diǎn):
1產(chǎn)品僅用于科研準(zhǔn)確可靠,臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)>1000例,結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì),結(jié)果*性大于99%。
2高靈敏:可檢測(cè)低至10ng的人基因組DNA。
3快速:整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí)。
4簡(jiǎn)便:試劑盒提供預(yù)混好的試劑,使體系配置操作簡(jiǎn)便。
5防污染
6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需*配對(duì),才能延伸。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì),在延伸中產(chǎn)生熒光。
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