注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:小鼠白血病病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格
英文名稱:Mouse Leukemia Virus(MLV)RTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
小鼠白血病病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
癸二酸二甲酯/皮脂酸二甲酯/泌脂酸二甲酯/Dimethyl sebacateCP,97%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,106-79-6RT
鄰苯二甲酸二壬酯/鄰苯二甲酸壬酯/鄰酞酸二壬酯/1,2-苯二甲酸二壬酯/增塑劑DNP/DNPAR,96%25毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,84-76-4RT
鄰苯二甲酸二正辛酯/苯二甲酸二辛酯/鄰酞酸二正辛酯/增塑劑DOP/鄰苯二酸二辛酯/鄰苯二甲酸二辛酯/DOPAR,99%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,117-84-0RT
癸二酸二正辛酯/皮脂酸二正辛酯/硬脂酸異辛酯/癸二酸二異辛酯/十八酸異辛酯/Di-n-octyl sebacateCP,99%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,27214-90-0RT
乙酰乙酸乙酯/丁酮酸乙酯/3-氧代丁酸乙基酯/乙酰醋酸乙脂ACE/乙基乙酰乙酸/EAACP500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,141-97-9RT
正庚酸乙酯/庚酸乙酯/水芹酸乙酯/科涅克油/葡萄子油/Ethyl heptanoateCP,98%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,106-30-9RT
月桂酸乙酯/十二酸乙酯/十二烷酸乙酯/Ethyl laurateCP,98.5%250毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,106-33-2RT
正辛酸乙酯/辛酸乙酯/羊脂酸乙酯/亞羊脂酸乙酯/Ethyl octanoateCP,98%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,106-32-1RT
油酸乙酯/十八烯酸乙酯/(Z)-9-十八烯酸乙酯/9-十八烯酸乙酯/油酸乙基酯/順-9-十八烯酸乙酯/Ethyl oleateLR,98%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,111-62-6RT,避光
硬脂酸乙酯/十八酸乙酯/硬酯酸乙酯/十八碳酸乙酯/Ethyl stearateCP50克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,111-61-5RT
對甲苯磺酸乙酯/4-甲苯磺酸乙酯/乙基-4-甲基苯磺酸酯/4-甲基苯磺酸乙酯/對甲苯磺酰乙酯/Ethyl p-toluene sulfonateCP,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,80-40-0RT
三乙酸甘油酯/甘油三乙酸酯/三醋酯/三醋酸甘油酯/丙三醇三乙酸酯/醋酸甘油酯/三醋精/1,2,3-丙三醇三乙酸酯/甘油三醋酸酯/甘油三乙醇酯/Glyceryl triacetateAR,98.5%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,102-76-1RT
油酸甘油酯/甘油單油酸酯/9-十八烯酸(Z)-2,3-二羥基丙酯/單油酸甘油酯/甘油單油酸酯/一油酸甘油酯/甘油油酸酯/MonooleinAR,40%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,111-03-5RT
三油酸甘油酯/甘油三油酸醋/(Z)-9-十八烯酸-1,2,3-丙三基酯/三油精/三苯基氯化四唑/油酸三甘酯/丙三醇三甘油酸酯/油精/甘油三油酸酯/Glycerol trioleateCP,98%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,122-32-7RT
小鼠白血病病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格Ethylcyclohexane 質(zhì)量規(guī)格:TLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
Origanum oil 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
NA 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
mulberroside A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
H-D-GLU(OME)-OH 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Isoprene 質(zhì)量規(guī)格:GC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
ISOBUTYLLITHIUM 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
LY 294002 HYDROCHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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