參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肉芽腫性曼氏桿菌病PCR檢測試劑盒
英文名稱:Mannheimia granulomatisPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?肉芽腫性曼氏桿菌病PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品僅用于科研特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
縮節(jié)胺/助壯素/N,N-二甲基哌啶氯化物/甲哌啶/調(diào)節(jié)啶/壯棉素/皮克斯/1,1-二甲基氮雜環(huán)己基氯化物/Mepiquat chloride高純,96%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,24307-26-4RT
噻苯隆/脫葉靈/脫葉脲/脫落寶/N-苯基-N-1,2,3-噻二唑-5-脲/賽苯隆/1-苯基-3-(1,2,3-噻二唑-5-基)脲/TDZ高純,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,51707-55-22~8℃
生根粉/Rooting Powde優(yōu)質(zhì)級100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
花寶1號/ N-P-K(7-6-19)優(yōu)質(zhì)級100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
花寶2號/N-P-K優(yōu)質(zhì)級100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
花寶3號/N-P-K優(yōu)質(zhì)級100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
花寶5號/N-P-K優(yōu)質(zhì)級50克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
茶多酚/茶精/綠茶提取物/PPT高純,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,84650-60-2RT,避光
兒茶素/(+)-兒茶素/兒茶酚/兒茶酸/(+)-兒茶精/(+)-兒茶酸/反式-3,3ˊ,4ˊ,4,7-五羥基黃烷/(+)-Catechin hydrateBR,90%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,225937-10-02~8℃,避光
乙酸-α-萘酯/乙酸-1-萘酯/醋酸-1-萘酯/1-乙酸萘基酯/α-乙酸萘酯/1-萘基乙酸酯/α-Napthyl acetateCP,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,830-81-92~8℃,避光
乙酸-β-萘酯/乙酸-2-萘酯/醋酸-β-萘酯/乙酸2-萘基酯/β-乙酸萘酯/2-萘基乙酯/醋酸-2-萘酯/β-萘基乙酸酯/β-Napthyl acetateCP25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1523-11-1RT,避光
3-氯殺/開樂散/Dicofol分析標(biāo)準(zhǔn)品100毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,115-32-22~8℃,避光
3-氨基-1,2,4-三唑/3-氨基-1,2,4-三氮茂/3-氨基-1H-1,2,4-三唑/3-氨基-1H-1,2,4-三氮唑/3-氨基-1,2,4-三氮唑/氨基三唑/1,2,4-三唑基-3-胺/殺草強(qiáng)/3-氨基-1,2,4-三氮雜茂/3-ATBR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,61-82-5RT
阿特拉津/莠去津/蓋薩林/2-氯-4-乙氨基-6-異丙氨基-1,3,5-三嗪/6-氯-N-乙基-N'-(1-甲基乙基)-1,3,5-三嗪-2,3-二胺/2-氯-4-乙基胺-6-異丙胺-s-三嗪/6-氯-N2-乙基-N4-異丙基-1,3,5-三嗪-2,4 -二胺/AtrazineBR,97%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1912-24-9RT
肉芽腫性曼氏桿菌病PCR檢測試劑盒Caesium fluoride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
OLEOYL CHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
NA 質(zhì)量規(guī)格:TLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Sodium periodate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Fmoc-Trp(Boc)-OH 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3-Hydroxycinnamic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
5,6,7,8-TETRAHYDROISOQUINOLINE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
(E)-4-[2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethenyl]-Phenol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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