型 號(hào)
產(chǎn)品時(shí)間2023-11-05
所屬分類(lèi)糖代謝系列
報(bào)價(jià)300
商品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):α糖苷酶(α GC)生化檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:100管/48樣 50管/24樣
貨號(hào) : EY-01S1242
測(cè)試方法:微量法 可見(jiàn)分光光度法
分類(lèi):糖代謝系列
商品詳情:
測(cè)定意義:
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成糖,不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān),而且與細(xì)胞識(shí)別和一些信號(hào)分子產(chǎn)生密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
α-GC分解對(duì)-苯-α-D吡喃糖苷生成對(duì)-,后者在400nm有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算α-GC活性。
自備用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A測(cè)定管=A1-A2。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
3、操作表:
試劑名稱(chēng)(μL) | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算:
1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。
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