植物ELISA試劑盒的原理:
樣品中的游離三聚氰胺與預(yù)包被在板子上的三聚氰胺蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合酶標記三聚氰胺抗體,通過洗滌洗掉未結(jié)合的酶標記三聚氰胺抗體,再通過酶的專一性顯色劑顯色根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中三聚氰胺含量。根據(jù)競爭性原理,如果樣品中的游離三聚氰胺量少,則酶標記的三聚氰胺抗體與包被在板子上的三聚氰胺偶聯(lián)物結(jié)合的多,顯色深,反之,則顯色淺。檢測時設(shè)置標準曲線,通過標準曲線測定樣品中三聚氰胺的含量。
植物ELISA試劑盒的實驗操作步驟如下:
1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可在小試管中進行稀釋。
2、加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑,再加入顯色劑,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11。、測定:以空白空調(diào)零,依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。