原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。因為可以模擬機體的功能,主要用于:生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究。
原代細胞的傳代和凍存過程:
細胞傳代:
原代細胞有間隙抑制接觸不良反應,所以細胞不能到達全部的密度的時候傳代,一般有效的建議觀察細胞的生長周期,原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代較佳,當生長至全部匯合時,它就會衰老。記住,所有的原代細胞不是全純,因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶,也可以嘗試下整體消化套裝,并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。
細胞凍存:
通常不推薦重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓T毎浅C舾?,重新凍結(jié)可能導致細胞死亡或損傷。
與細胞系不同,原代細胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型,你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài),因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。